(Protozoa), таксономическая группа микроскопических, в принципе одноклеточных, но иногда объединенных в многоклеточные колонии организмов. Примерно 30 000 описанных видов. Все простейшие - эукариоты, т.е. их генетический материал, ДНК, находится внутри окруженного оболочкой клеточного ядра, что отличает их от прокариотных бактерий, у которых оформленное ядро отсутствует. Структурные и физиологические признаки . Хотя тело простейших состоит из единственной клетки, это полноценные организмы, координированно осуществляющие все жизненно необходимые функции, включая питание, выделение продуктов распада и размножение. Большинство простейших - гетеротрофы, т.е., подобно животным, питаются готовыми органическими веществами, присутствующими в окружающей среде. Однако некоторые виды содержат пигмент хлорофилл и, как растения, способны, используя солнечную энергию, образовывать (фотосинтезировать) органические вещества (углеводы) из неорганических, т.е. питаться автотрофно. В связи с этим простейших относили то к растениям, то к животным, то выделяли в особую группу. Одна из современных классификационных схем помещает простейших вместе с одноклеточными водорослями и некоторыми другими организмами в царство протистов (Protista), в рамках которого простейшие считаются самостоятельным подцарством. Основные группы . Форма и строение клеток простейших весьма разнообразны; для некоторых групп характерны поверхностные чешуйки, раковины и даже сложно устроенные твердые скелеты. Однако по способу локомоции (речь идет прежде всего о свободноживущих, не паразитических организмах) их можно разделить на три главные группы: 1) жгутиковые, передвигающиеся с помощью немногих, но длинных нитевидных придатков (жгутиков); 2) ресничные (инфузории), использующие для этой цели обычно многочисленные, но короткие волосовидные структуры (реснички); 3) амебоидные (корненожки), «перетекающие» по твердому субстрату благодаря изменениям формы клетки. Некоторые очень мелкие паразитические виды обходятся без локомоции.

Самые мелкие простейшие относятся к роду

Некоторые простейшие покрыты органическими или минерализованными чешуйками, панцирями и раковинками, различными по строению и составу, или же обладают жестким внутриклеточным скелетом, обычно представляющим собой сложную решетчатую структуру.

Физиология . Простейшие фотосинтезируют органику (автотрофы) либо поглощают из среды органику (гетеротрофы), или же используют оба способа питания (миксотрофы). Гетеротрофы либо всасывают растворенные вещества поверхностью клетки (осмотрофы), либо заглатывают с помощью различных механизмов твердую пищу (фаготрофы), включая другие организмы (в том числе простейших), иногда преследуя для этого добычу. Твердые продукты обмена удаляются из клетки в окружающую среду путем слияния содержащих их вакуолей с наружной мембраной, иногда в специализированном ее участке (клеточной порошице, цитопрокте). Избыток воды с некоторыми растворенными метаболическими отходами активно выкачивается наружу сократительными вакуолями.

Дыхание простейших бывает анаэробным (бескислородным) или аэробным (требующим кислородной среды). Для облигатных анаэробов кислород вреден, и в богатой им среде они гибнут. Некоторые облигатные анаэробные простейшие в бедных кислородом водных местообитаниях дышат с помощью симбиотических бактерий. Интенсивность дыхания прямо пропорциональна температуре, а также зависит от типа метаболизируемого субстрата, т.е. молекул, расщепляемых для получения энергии, и таксономической группы.

Тема : Морфология простейших.

Цель: Изучение морфологии патогенных простейших в препаратах из патологического материала.

Модуль 1.

Тема 6: Морфология и структура бактерий, спирохет, актиномицет, грибов и простейших.

Актуальность темы. Простейшие (Protozoa) это эукариотические одноклеточные организмы, имеющие микроскопические размеры. Патогенные для человека простейшие принадлежат к разным классам: саркодовые (дизентерийная амеба), жгутиковые (лейшмании, лямблии, трихомонады, трипаносомы), споровики (токсоплазма, малярийные плазмодии), реснитчатые (балантидии).

Простейшие широко распространены в природе. Это связано со способностью простейших к быстрому размножению, их маленькими размерами, а также тем, что в неблагоприятных условиях большинство из них образует цисты, которые способны переносить изменения температуры, влажности и др. Для простейших характерен сложный жизненный цикл, иногда со сменой хозяина, как, например, у возбудителя малярии (комар-человек) или токсоплазмоза (кошка-человек).

Простейшие имеют органы движения (жгутики, реснички, псевдоподии), питания (вакуоли), и также у них возможно питание путем фагоцитоза. Размножаются они несколькими путями: простым и множественным делением, половым путем, образованием цист. Поверхность тела простейших покрыта клеточной мембраной. У большинства из них есть внешняя эластическая оболочка пелликула, выполняющая защитную функцию. Для проникновения в клетку хозяина у простейших имеются специальные приспособления, например у токсоплазм сложный комплекс органелл коноид с фибриллами, трихомонады и лямблии имеют специальные присоски.

Для выявления простейших используется микроскопия нативных и окрашенных препаратов из исследуемого материала с применением иммерсионного, фазово-контрастного или люминесцентного микроскопов. Для изучения ультраструктуры используется электронная микроскопия.

Конкретные цели:

Ознакомиться с классификацией патогенных простейших.
Разобрать и изучить схемы жизненных циклов патогенных простейших.
Научиться трактовать морфологические признаки каждого вида.
Сделать выводы о морфологических формах простейших.
Научиться трактовать и анализировать результаты микроскопического исследования патогенных простейших.

Уметь:

Проводить микроскопию препаратов патогенных простейших, окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Анализировать морфологические признаки патогенных простейших.

Теоретические вопросы:

Классификация простейших.
Структура клеток простейших (эукариотов).
Сравнительная характеристика клеточного строения прокариотов и эукариотов.
Методы окраски простейших.
Возможность исследования нативных препаратов для диагностики протозойных инфекций.
Приоритет отечественных ученых в изучении некоторых протозойных инфекций. Работы В.А. Леша, Е.И. Марциновского, П.Ф. Боровского.

Микроскопия демонстрационных препаратов патогенных простейших, окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Зарисовка демонстрационных препаратов и схем жизненных циклов патогенных простейших в протокол.
Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / Учебник для медицинских ВУЗов, СанктПетербург «Специальная литература», 1998.592 с.

2.Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1983, - 512с.

3. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією. Київ: Вища школа, 1992. 431с.

4.Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского. М.:ГЕОТАР-МЕД,2001.-768с.

5. Циганенко А.Я., Павленко Н.В. Мікробіологія, вірусологія та імунологія /Керівництво до практичних занять для студентів медичних та фармацевтичних ВУЗів, Харків, ХДМУ, 1996. 272с.

5. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Казанцев А.П. Токсоплазмоз. - М.: Медицина, 1985. - 168 с.

2. Епiдемiологiя. / За ред. Синяк К.М. - К.: Здоров я, 1993. - 460с.

3. Иммунология инфекционного процесса. / Под ред. Покровского В.И., Гордиенко С.П., Литвинова В.И. - М.: Медицина, 1993. - 305 с.

4. Лобан К.М., Полозок Е.С. Малярия. М.: Медицина, 1983. - 224с.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации простейших, разбора схем жизненных циклов простейших, патогенных для человека. Затем студенты изучают демонстрационные препараты и зарисовывают их в протокол занятия.

п/п	Этапы	Время в мин	Способы обучения	Оснащение	Место прове дения
				Таблицы, атлас	Учеб ная комна та
	Самостоятельная работа		Граф логической структуры	Иммерсионный микроскоп, препараты патогенных простейших, окрашенны е по Романовскому-Гимзе
			Целевые обучающие задания
	Тестовый контроль		Тесты
	Анализ результатов работы

Целевые обучающие задания к теме «МОРФОЛОГИЯ ПРОСТЕЙШИХ»:

1. У беременной в мазках крови при микроскопии были обнаружены токсоплазмы. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков имеет этот возбудитель в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?

2. У больного с жалобами на частый жидкий стул и схваткообразными болями в животе в баклаборатории была выделена Entamoeba histolytica

B. Удлиненные клетки с 1 жгутиком, 1 ядром и ундулирующей мембраной.

D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и поглощенными эритроци-тами.

3. В клинику поступил больной, которому был поставлен предваритель-ный диагноз: малярия, вызванная P.ovale. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков имеет этот возбудитель в стадии кольца в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?

A. В увеличенных эритроцитахкольцевидные трофозоиты и зерна Шюфф-нера

B. В увеличенных овальных эритроцитахвакуоли, окаймленные голубой ци-топлазмой с рубиновыми крупными ядрами и крупные зерна Джеймса.

E. Клетки в форме полумесяца с 1 рубиновым ядром и голубой цитоплазмой.

4. К врачу обратился мужчина 35 лет с мокнущей язвой на правой ноге. Известно, что пациент 2 недели назад вернулся из Африки. При микроскопическом исследовании мазков из отделяемого язвы, окрашенных по Романовскому-Гимзе, обнаружили внутриклеточно расположенные мелкие клетки овальной формы без жгутиков с серовато-голубой цитоплазмой и красно-фиолетовым ядром. Для какого из перечисленных ниже простейших характерна такая морфологическая форма?

А . Plasmodium malariae

В . Leishmania tropica

С . Toxoplasma gondii

D. Trichomonas vaginalis

E. Giardia lamblia

5. При микроскопическом исследовании свежих испражнений больного с жалобами на жидкий стул, вздутие живота, потерю аппетита были обнаружены клетки грушевидной формы с симметрично расположенными 2 ядрами, 2 базальными тельцами, 2 парабазальными тельцами, 2 нитями аксостиля и 4 парами жгутиков. Для какого из перечисленных ниже простейших характерна такая морфологическая форма?

А . Plasmodium malariae

В . Leishmania tropica

С . Toxoplasma gondii

D. Trichomonas vaginalis

E. Giardia lamblia

6. К врачу-инфекционисту обратился пациент с жалобами на сонливость, утомляемость, истощение, лихорадку. Известно, что он недавно был в командировке в Африке. При микроскопии мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, обнаружены клетки удлиненной формы с 1 центральным ядром, 1 жгутиком, отходящим от задней части клетки, и резко выраженной ундулирующей мембраной. Для какого из перечисленных ниже простейших характерна такая морфологическая форма?

А . Trypanosoma brucei

В . Leishmania tropica

С . Toxoplasma gondii

D. Trichomonas vaginalis

E. Giardia lamblia

7. У больного с жалобами на жидкий стул, вздутие живота, потерю аппетита в баклаборатории была выделена Giardia lamblia . Какая из перечисленных ниже морфологических форм характерна для этого возбудителя в мазках из свежих испражнений?

A. Округлые клетки с 1 ядром и кинетопластом.

B. Удлиненные клетки с 1 жгутиком, 1 ядром и ундулирующей мембраной.

C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 4 парами жгутиков.

E. Клетки в форме полумесяца с 1 ядром.

8. У больной с клиникой вагинита в баклаборатории при микроскопии были обнаружены трихомонады. Какие из перечисленных ниже морфологи-ческих признаков имеет этот возбудитель в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?

A. Округлые клетки с рубиновым ядром, голубой цитоплазмой, красными 5 жгутиками и аксостилем, и ундулирующей мембраной.

B. Удлиненные клетки с 1 жгутиком, 1 ядром и ундулирующей мембраной.

C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 4 парами жгутиков.

D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и проглоченными эритроци-тами.

E. Клетки в форме полумесяца с 1 ядром.

9. В клинику поступил больной, которому был поставлен предваритель-ный диагноз: малярия, вызванная P.vivax. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков имеет этот возбудитель в стадии кольца в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?

A. В увеличенных эритроцитах крупные центральные вакуоли, окаймленные голубой цитоплазмой с рубиново красными ядрами, и зерна Шюффнера.

B. В увеличенных овальных эритроцитах кольцевидные крупноядерные тро-фозоит и крупные зерна Джеймса.

C. В эритроцитах по 2-3 мелких трофозоита и единичные крупные розово-фиолетовые пятна Мауэра.

D. В лентовидных эритроцитах по 1 кольцевидному трофозоиту.

E. Клетки в форме полумесяца с 1 рубиновым ядром и голубой цитоплазмой.

10. У больного с жалобами на сонливость, утомляемость, истощение, лихорадку, который недавно был в командировке в Африке, в баклаборатории была выделена Trypanosoma brucei . Какая из перечисленных ниже морфологических форм характерна для этого возбудителя в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе?

A. Округлые клетки с 1 ядром и кинетопластом.

B. Удлиненные клетки с 1 жгутиком, 1 ядром и ундулирующей мембраной.

C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 8 жгутиками.

D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и проглоченными эритроци-тами.

E. Клетки в форме полумесяца с 1 ядром.

Ознакомление с классификацией простейших.
Изучение морфологии простейших по схемам, таблицам и демонстра-ционным препаратам.
Разбор схемы жизненного цикла малярийных плазмодиев.
Разбор схемы жизненного цикла трипаносом, лейшманий, лямблий, три-хомонад, токсоплазм.
Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов простейших.
Зарисовка демонстрационных препаратов и схем жизненных циклов простейших.
Оформление протокола.

Граф логической структуры темы: «МОРФОЛОГИЯ ПРОСТЕЙШИХ»

Тип

Методические указания для студентов к практическому занятию № 7

Тема:

Цель: Изучить морфологию и методы выявления риккетсий, хламидий и микоплазм.

Модуль 1: Морфология и физиология микроорганизмов.

Тема 7: Морфология риккетсий, хламидий и микоплазм.

Актуальность темы. На территории стран СНГ наблюдаются следующие риккетсиозы: сыпной тиф (в том числе болезнь Бриля), крысиный тиф, марсельская лихорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии, везикулёзный риккетсиоз, Ку-лихорадка, лихорадка цуцугамуши, волынская лихорадка. Имеются активно действующие природные очаги везикулёзного риккетсиоза, марсельской лихорадки, лихорадки цуцугамуши и клещевого сыпного тифа Северной Азии.

Эпидемический сыпной тиф это остропротекающая системная инфекция с тяжелой интоксикацией, при быстром эпидемическом распространении дающая до 30% летальных исходов.

Лабораторная диагностика многих риккетсиозов основывается на выделении возбудителя из крови больных. В этой связи необходимо знать морфологию риккетсий и методы их окраски для распознания их под микроскопом.

Название этой группе микроорганизмов дал в 1916г. Роха-Лима, предложивший назвать возбудителя сыпного тифа Rickettsia prowazekii в честь двух учёных: американского Г.Т. Риккетса и чешского С. Прова-чека, которые первыми его обнаружили (Г.Т. Риккетс в 1909г., С. Провачек в 1913г.) при изучении сыпного тифа и, заразившись погибли от него.

Семейство Ricrttsiaceae состоит из трёх триб: Rickettsiaceae , Ehrlichiae , Wolbachieae . Триба Rickettsiaceae делится на 4 рода: Rickettsia , Rochalimaea , Coxiella , Ehrlichia .

Хламидии уникальная группа мелких патогенных грамотрицательных неподвижных бактерий, являющихся возбудителями различных болезней, человека и животных. У людей они вызывают заболевания глаз, мочеполовой и дыхательной систем. Ежегодно трахомой болеют от 400до 500 млн. человек, из них свыше 10 млн. становятся слепыми. Уретритами хламидийной этиологии страдают до 6% мужчин; 10-12% женщин детородного возраста, у 50% которых при родах происходит инфицирование ребёнка и развивается офтальмия и пневмония новорожденных.

Хламидии облигатные внутриклеточные организмы прокариотной системы. Имеют сферическую форму, РНК и ДНК, рибосомы, клеточные стенки по строению сходны со стенками грамотрицательных бактерий, но лишены пептидогликанов; хорошо красятся по Романовскому-Гимзе.

Хламидии размножаются бинарным делением только в цитоплазме эукариотных клеток по уникальному циклу развития.

Жизненный цикл хламидий представлен двумя основными формами, сменяющими друг друга ретикулярные тельца (вегетативная форма) и элементарные тельца (спороподобные формы).

Элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная внеклеточная форма. Они обеспечивают передачу заболевания от человека (животного) к человеку. Ретикулярное тельце (РТ) внутриклеточная форма, развивается из ЭТ попавшего в цитоплазму. После образования РТ хламидийная клетка бинарно делится, образуются тельца включения в виде вакуолей в цитоплазме. Тельца включения прилегают к ядру клетки и их можно выявить в иммерсионном микроскопе при окраске, что используется для диагностики хламидиозов.

Для человека патогенны следующие представители рода Chlamydia : C . trachomatis , C . psittaci , C . pneumoniae .

Классификация хламидий:

Семейство Chlamydiaceae

род Chlamydia род Chlamydophila

C.trachomatis C.pneumoniae

C.suis C.pecorum

C.muridarum C.psittaci

C.abortus

C.caviae

C . felis

Бактериологическая диагностика хламидиозов состоит из предвари-тельного микроскопического исследования материала с целью обнаружения хламидий в инфицированных клетках, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

Многие виды микоплазм патогенны для человека, и вызывают поражения дыхательных путей, суставов, сердца, мочеполовой и нервной систем.

30-60% уретритов негонококковой этиологии вызваны M . hominis . Существует мнение, что уреаплазменная инфекция может быть причиной как женского так и мужского бесплодия. Кроме того, M . hominis при внутриутробном заражении плода может быть причиной врождённых аномалий развития ребёнка в связи с её способностью воздействовать на хромосомы клетки.

Лабораторная диагностика не играет решающей роли в распознавании микоплазменной пневмонии. Широко используется выделение чистой культуры возбудителя с последующей идентификацией на основании морфологических, культуральных и др. признаков.

Микоплазмы свободноживущие прокариоты, не имеющие истинной клеточной стенки и не способны синтезировать её компоненты. Функции клеточной стенки выполняет трёхслойная цитоплазматическая мембрана. Большинство видов представлены мелкими клетками, характеризующимися выраженным плеоморфизмом, могут образовывать кокковидные, ветвящиеся и более крупные многоядерные формы способные образовывать псевдомицелий. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе.

От человека выделяют представителей рода Mycoplasma , Ureaplasma включающих патогенные и сапрофитные виды.

Классификация микоплазм:

Семейство Mycoplasmaceae

род Mycoplasma род Ureaplasma

M.buccale Ureaplasma urealyticum

M.fermentans

M.hominis

M.pneumoniae

M.genitalium

M.orale

M.salivarum

Для человека патогенны M.pneumoniae, M.hominis, Ureaplasma urealyticum.

Конкретные цели:

Уметь:

Описывать окрашенные микропрепараты приготовленные из мико-плазм.
Микроскопировать, описывать и трактовать окрашенные микропрепа-раты приготовленные из материала, где содержатся риккетсии, цито-плазматические включения хламидий.
Анализировать результаты микроскопического исследования материа-ла, где содержатся риккетсии, хламидии, микоплазмы.

Теоретические вопросы:

Таксономия риккетсий.
Морфология риккетсий, их классификация по форме.
Методы окраски риккетсий
Представители риккетсий, патогенные для человека.
Таксономия хламидий, их классификация, патогенные представители.
Биологическая особенность хламидий. Основные стадии жизненного цикла хламидий.
Морфология хламидий, ретикулярные тельца, элементарные тельца.
Методы обнаружения цитоплазматических включений хламидий. Практическое использование телец-включений.
Таксономия микоплазм. Классификация, патогенные представители.
Ультраструктура и морфология микоплазм.
Методы окраски микоплазм.
Представители микоплазм патогенные для человека.

Практическая работа, которая выполняется на занятии:

Микроскопировать демонстрационный препарат, приготовленный из чистой культуры микоплазм и окрашенный по Романовскому-Гимзе.
Микроскопировать окрашенные по Здродовскому и Романовскому-Гимзе мазки из материала, содержащего риккетсии.
Микроскопировать мазок, приготовленный из соскоба уретры и окрашенный по Романовскому-Гимзе, с целью обнаружения включений в цитоплазме клеток эпителия уретры.
Зарисовать демонстрационные препараты в протокол.
Зарисовать в протокол жизненного цикла хламидий.
Оформить протокол.

Литература:

Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998.-579с.
Воробьёв А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микро-биология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.
Конспект лекции.

Краткие методические указания для работы на практических занятиях.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов по данной теме.

Самостоятельная работа состоит из изучения морфологии и ультраструктуры риккетсий, хламидий и микоплазм по цветным таблицам.

Студенты просматривают окрашенные демонстрационные препараты в иммерсионном микроскопе, зарисовывают их в протокол, указывая латинское название микроорганизма и метод окраски.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ самостоя-тельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия:

пп	Этапы	Время в мин.	Средства обучения	Оборудование	Место проведе ния
	Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию		Тестовые задания исходного уровня	Таблицы, атлас, рисунки	УЧЕБНАЯ КОМНАТА
	Самостоятельная работа		Графы логической структуры	Иммерсионный микроскоп; микропрепараты из культу-ры микоплазм, окрашен-ных по Романовскому-Гимзе; микропрепарат из материала, содержащего риккетсии, окрашенный по Здродовскому; оксифиль-ные включения элементар-ных телец C . trachomatis в цитоплазме эпителиоцитов уретры. Окраска по Рома-новскому-Гимзе.
	Самопроверка и коррекция усвоенного материала		Целевые учебные задания
	Тестовый контроль		Тесты
	Анализ результа-тов работы

Целевые учебные задания к теме: «МОРФОЛОГИЯ РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ И МИКОПЛАЗМ»

Из плевральной жидкости больного атипичной пневмонией выделен возбудитель, который отличается полиморфизмом, окрашивается по Романовскому-Гимзе. Какой из перечисленных микроорганизмов, вероятнее всего, вызвал атипичную пневмонию.

А . Mycoplasma pneumoniae B. Mycoplasma artrrhitidis

C. Mycoplasma orale D. C.trachomatis

E . Rickettsia prowazekii

2. В кожно-венерологический диспансер поступил больной с диагнозом «негонококковый уретрит». Какой из перечисленных микроорганизмов является возбудителем данного заболевания.

А . Ureaplasma urealyticum B. Mycoplasma pneumoniae

C. Mycoplasma artrrhitidis D. Mycoplasma orale

E . Mycoplasma fermentans

3. В мазке-соскобе из уретры больного при окраске по Романовскому-Гимзе обнаружены включения в виде шапочки вблизи ядра. Какой из перечисленных возбудителей может вызвать подобные образования в клетках призматического эпителия уретры.

C. Chlamydia psittaci D. Ureaplasma urealyticum

E . Trihomonas vaginalis

4. Через 5 дней после купания в бассейне у купальщика обнаружили забо-левание глаз, выражающееся утолщением конъюнктивы и ярко-красной окраской нижнего свода. В мазке, приготовленном из отделяемого конъю-нктивы глаза, обнаружили включения в пораженных клетках. Какой возбудитель вызвал у купальщика конъюнктивит с включениями.

A. Chlamydia trachomatis B. Chlamydia pneumoniae

C . Стафилококк D . Гонококк Е. Аденовирусы

5. У работников зоопарка, ухаживающих за попугаями, возникла атипич-ная пневмония. Какой возбудитель явился причиной данного заболевания.

A. Chlamydia psittaci B. Mycoplasma pneumoniae

C. Chlamydia trachomatis D. Ureaplasma urealyticum

E . Mycoplasma hominis

6. У водителя дальних рейсов врач заподозрил сыпной тиф и взял кровь для лабораторной диагностики сыпного тифа. Как называется возбудитель сыпного тифа.

A. Treponema pallidum B. Borrelia recurrentis

C. Mycoplasma pneumoniae D. Rickettsia prowazekii

E . Coxiella burnetti

В. Спирохеты

С. Микоплазмы

D . Вибрионы

Е. Спириллы

Алгоритм лабораторной работы:

Изучить по таблице морфологию и ультраструктуру риккетсий.
Изучить технику окраски риккетсий по Здродовскому.
Микроскопировать готовые препараты из материала, содержащего риккетсии и окрашенного по Здродовскому.
Изучить по таблице и зарисовать цикл развития хламидий.
Микроскопировать окрашенный по Романовскому-Гимзе мазок-сос-коб из уретры больного с включениями C . trachomatis .
Изучить по таблице структуру микоплазм.
Микроскопировать готовый мазок из культуры микоплазм, окра-шенный по Романовскому-Гимзе.
Проанализировать демонстрационные препараты.
Зарисовать демонстрационные микропрепараты в протокол. Оформить протокол.

Графологічна структура теми "МОРФОЛОГІЯ РИКЕТСІЙ, ХЛАМІДІЙ ТА МИКОПЛАЗМ”

Методические указания для студентов к практическому занятию № 8

Тема: Морфология вирусов человека и бактериофагов.

Цель: Изучение морфологии вирусов человека и бактериофагов.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов, парази-тических одноклеточных эукариотов и вирусов.

Тема 8: Морфология и структура бактерий, спирохет, актиномицетов, гри-бов, простейших и вирусов.

При помощи электронного микроскопа установлено, что простые вирионы состоят из нуклеиновой кислоты, плотно упакованной в белковую оболочку капсид, имеющий строго упорядоченную структуру. По морфологической структуре нуклеиновая кислота и капсид представляют собой нуклеокапсид, а по химическим свойствам это нуклеопротеиды. У некоторых вирусов (аденовирусы, пикорнавирусы, паповавирусы) нуклеокапсид состоит из капсомеров, представляющих собой скопление полипептидов. Многие сложно организованные вирионы имеют еще и внешнюю оболочку (суперкапсид), в которой содержатся липиды и углеводы клетки хозяина. Суперкапсид оболочка, окружающая нуклеокапсид, имеется у многих вирусов (миксовирусы, герпесвирусы и др.). В зависимости от порядка расположения капсомеров различают вирусы с тремя типами симметрии: спиральным, кубическим, смешанным.

Морфологию и структуру вирусов изучают при помощи электронного микроскопа. Кроме полноценных вирионов встречаются дефектные вирусы и псевдовирионы. Дефектный вирус это вирус, который функционально неполноценный на некоторых этапах репродукции. Псевдовирионы это вирусы, в капсид, которых заключена нуклеиновая кислота клетки хозяина, а не вирусная нуклеиновая кислота.

Бактериофаги это вирусы микробных клеток, которые вызывают их лизис. Лизис бактериальных клеток впервые обнаружил в 1898 г. русский микробиолог Н.Ф.Гамалея. Вирусы, поражающие микроорганизмы, назвали фагами. Фаги различаются по морфологии, типу нуклеиновой кислоты, по химической структуре и характеру взаимодействия с микробной клеткой. Например, фаги кишечной палочки состоят из головки, воротничка, хвостового отростка, базальной пластинки с короткими шипами и хвостовыми нитями. Головка фага, диаметр которой колеблется в пределах 60-90 нм, имеет шестиугольную форму. Внутри головки содержится нуклеиновая кислота, окруженная белковой оболочкой. Хвостовой отросток фага состоит из полого цилиндрического стержня, окруженного сократительным чехольчиком. Хвостовой отросток достигает 250 нм в длину и 30 нм в ширину. Базальная пластинка имеет шестиугольную форму. От нее отходят шесть шипов и шесть хвостовых нитей (фибрилл). Хвостовой отросток обеспечивает прикрепление фага к микробной клетке.

Существуют фаги и другого строения: с длинным отростком и несокращающимся чехольчиком, с коротким отростком и без отростка. Фаги обладают строгой специфичностью и поражают лишь определенные виды микроорганизмов. Различают моновалентные фаги, лизирующие микробные клетки определенного вида, и поливалентные фаги, способные вызвать лизис группы родственных видов микроорганизмов. На основании специфичности фаги широко используются для идентификации микроорганизмов.

Конкретные цели :

Ознакомиться с классификацией вирусов и бактериофагов .
Разобрать и изучить схемы репродукции вирусов и бактериофагов .
Научиться трактовать морфологические признаки каждого семейства вирусов .
Сделать выводы о морфологических признаках вирусов .
Научиться трактовать и анализировать результаты микроскопического исследования ЦПД вирусов .

Уметь:

Проводить микроскопию препаратов с цитопатическим действием виру-сов с помощью иммерсионного микроскопа.
Анализировать морфологические признаки вирусов.

Теоретические вопросы:

Биологические особенности вирусов.
Морфология и ультраструктура вирусов (с указанием специфических тер-минов).
Электронный микроскоп. Принцип работы.
Методы непрямого выявления наличия вирусов в организме.
Методы выявления вирусов в исследуемом материале с использованием иммерсионной люминесцентной микроскопии.
Понятие о люминесцентном микроскопе.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

Микроскопия демонстрационных препаратов цитопатического действия вирусов.
Зарисовка демонстрационных препаратов и схем репродукции вирусов в протокол.
Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, СанктПетербург «Специальная литература», 1998. 592 с.

2. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1983,- 512с.

3. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імуноло-гією. Київ: Вища школа, 1992. 431с.

4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского. М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

6. Балаклієць Н.І, Циганенко А.Я., Мінухін В.В. Загальна мікробіологія: Навчальний посібник для студентів мед. і фарм. ВУЗів /За редакцією А.Я. Циганенка. Х.: Основа, 2002. 248 с.

7. Конспект лекции.

Д ополнительная литература :

1. Букринская А.Г., Жданов В.М. Молекулярные основы патогенности вирусов.- М.: Медицина, 1991.- 255 с.

2. Посібник з медичної вірусології /Під редакцією Гиріна В.М.- К.: Здоров"я, 1995.- 368 с.

3. Вирусология в 3-х томах /Под редакцией Филдса Б. и др.- М.: Мир, 1989.- 494 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации вирусов , разбора схем репликации вирусов и бактериофагов. Затем студенты изучают демонстрационные препараты и зарисовывают их в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ конечных результатов самостоятельной роботы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия.

п/п	Этапы	Время в мин	Способы обучения	Оснащение	Место прове дения
	Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию		Тестовые задания исходного уровня	Таблицы, атлас , учебны й с тенд по вирусологии	Учеб ная комна та
	Самостоятельная работа		Граф логической структуры	Иммерсионный микроскоп, демонстрацион ные препараты с ЦПД вирусов
	Самостоятельная проверка и коррекция освоения материала		Целевые обучающие задания
	Тестовый контроль		Тесты
	Анализ результатов работы

Целевые обучающие задания к теме «МОРФОЛОГИЯ ВИРУСОВ ЧЕЛОВЕКА ИБАКТЕРИОФАГОВ»:

1. К РНК-содержащим вирусам относятся:

А. Парамиксовирусы

В. Парвовирусы

С. Герпесвирусы

D . Аденовирусы

Е. Поксвирусы

2. Какую форму имеет вирус бешенства?

А. Сферическую

В. Палочковидную

С. Нитевидную

D . Пулевидную

Е. Ланцетовидную

3. Какие из перечисленных вирусов имеют нуклеокапсид со спиральным типом симметрии?

А. Энтеровирусы, вирусы

гепатита А

В. Вирусы бешенства, гриппа,

паротита

С. Аденовирусы, реовирусы

D. Вирусы гепатита А,

клещевого энцефалита

Е. Энтеровирусы, герпесвирусы

4. Какой тип симметрии присущ бактериофагам?

А. Икосаэдрический

В. Бинарный

С. Трапециевидный

D . Ромбовидный

Е. Нитевидный

5. К оболочечным вирусам относят:

А. Ретровирусы

В. Реовирусы

С. Аденовирусы

D . Пикорнавирусы

Е. Парвовирусы

6. Структурная единица нуклеокапсида это:

А. Пепломер

В. Капсомер

С. Изомер

D . М-белок

Е. Липид

7. Чем обусловлен спиральный тип симметрии капсида вирусов?

А. Винтообразной структурой

нуклеокапсида

В. Образованием изометрически

полого тела

С. Изменением структуры капсида

D . Образованием пепломеров

Е. Синтезом белковой оболочки

8. Как называются вирусы, в капсид которых заключена нуклеиновая кислота клетки-хозяина?

А. Псевдовирионы

В. Бактериофаги

С. Дефектные вирусы

D . Поксвирусы

Е. Аденовирусы

Алгоритм лабораторной работы:

Ознакомление с классификацией вирусов и бактериофагов.
Изучение молекулярно-генетической организации и репродукции вирусов и бактериофагов по схемам, таблицам и атласу.
Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов с ЦПД вирусов.
Зарисовка демонстрационных препаратов и схем репродукции вирусов.
Оформление протокола.

Г раф логической структуры темы: “МОРФОЛОГИЯ ВИРУСОВ ЧЕЛОВЕКА И БАКТЕРИОФАГОВ”

Простейшие – эукариотические одноклеточные микроорганизмы, составляющие подцарство Protozoa царства животных (Animalia). Простейшие включают 7 типов, из которых три типа (Sarcomastigophora, Apicomplexa, Ciliophora) имеют представителей, вызывающих заболевания у человека. Размеры простейших колеблются в среднем от 5 до 30 мкм. Снаружи простейшие окружены мембраной (пелликулой) – аналогом цитоплазматической мембраны клеток животных. Некоторые простейшие имеют опорные фибриллы. Цитоплазма и ядро соответствуют по строению эукариотическим клеткам: цитоплазма состоит из эндоплазматического ретикулума, митохондрий, лизосом, многочисленных рибосом и др.; ядро имеет ядрышко и ядерную оболочку. Передвигаются простейшие посредством жгутиков, ресничек и путем образования псевдоподий. Простейшие могут питаться в результате фагоцитоза или образования особых структур. Многие простейшие при неблагоприятных условиях образуют цисты – покоящиеся стадии, устойчивые к изменению температуры, влажности и др. Простейшие окрашиваются- по Романовскому-Гимзе (ядро – красного, цитоплазма – синего цвета).

Тип Sarcomastigophora. Подтип Mastigophora (жгутиконосцы) включает следующих патогенных представителей:

§ трипаносому – возбудителя африканского трипаносомоза (сонная болезнь);

§ лейшмании – возбудителей кожной и висцеральной форм лейшманиозов;

§ лямблию – возбудителя лямблиоза.

Эти простейшие характеризуются наличием жгутиков: один – у лейшмании, четыре свободных жгутика и короткая ундулирующая мембрана – у трихомонад.

К подтипу Sarcodina (саркодовые) относится дизентерийная амеба – возбудитель амебной дизентерии человека. Морфологически сходна с ней непатогенная кишечная амеба. Эти простейшие передвигаются путем образования псевдоподий. Питательные вещества захватываются и погружаются в цитоплазму клеток. Половой путь размножения у амеб отсутствует. При неблагоприятных условиях они образуют цисту.

Тип Apicomplexa. В классе Sporozoa (споровики) патогенными представителями являются возбудители токсоплазмоза, кокцидиоза, саркоцистоза и малярии. Жизненный цикл возбудителей малярии характеризуется лередо-ванием полового размножения (в организме комаров Anopheles) и бесполого (в клетках тканей и эритроцитах человека они размножаются путем множественного деления). Токсоплазмы имеют форму полулуний. Токсоплазмозом человек заражается от животных. Токсоплазмы могут передаваться через плаценту и поражать центральную нервную систему и глаза плода.

Тип 3. Патогенный представитель – возбудитель балантидиаза – поражает толстый кишечник человека. Балантидии имеют многочисленные реснички и поэтому подвижны.

Тип Sarcomastigophora. Подтип Mastigophora (жгутиконосцы) включает следующих патогенных представителей:

§ трипаносому – возбудителя африканского трипаносомоза (сонная болезнь);

§ лейшмании – возбудителей кожной и висцеральной форм лейшманиозов;

§ лямблию – возбудителя лямблиоза.

Простейшие представлены одноклеточными организмами, тело которых состоит из цитоплазмы и одного или нескольких ядер. Клетка простейшего - это самостоятельная особь, проявляющая все основные свойства живой материи. Она выполняет функции всего организма, тогда как клетки многоклеточных составляют лишь часть организма, каждая клетка зависит от многих других.

Принято считать, что одноклеточные существа более примитивны, нежели многоклеточные. Однако, поскольку все тело одноклеточных по определению состоит из одной клетки, эта клетка должна уметь делать все: и питаться, и двигаться, и нападать, и спасаться от врагов, и переживать неблагоприятные условия среды, и размножаться, и избавляться от продуктов обмена, и защищаться от высыхания и от чрезмерного проникновения воды внутрь клетки.

Многоклеточный организм тоже все это умеет, но каждая его клетка, взятая в отдельности, хорошо умеет делать только что-нибудь одно. В этом смысле клетка простейшего - отнюдь не примитивнее клетки многоклеточного организма.

Большинство представителей класса имеет микроскопические размеры - 3-150 мкм. Только наиболее крупные представители вида (раковинные корненожки) достигают 2-3 см в диаметре.

Строение тела простейшего типично для эукариотической клетки. Имеются органеллы общего (митохондрии, рибосомы, клеточный центр, ЭПС и др.) и специального назначения. К последним относятся органы движения: ложноножки, или псевдоподии (временные выросты цитоплазмы), жгутики, реснички, пищеварительные и сократительные вакуоли. Органоиды общего значения присущи всем эукариотическим клеткам.

Органоиды пищеварения - пищеварительные вакуоли с пищеварительными ферментами (сходны по происхождению с лизосомами). Питание происходит путем пино- или фагоцитоза. Непереваренные остатки выбрасываются наружу. Некоторые простейшие имеют хлоропласты и питаются за счет фотосинтеза.

Пресноводные простейшие имеют органы осморегуляции - сократительные вакуоли, которые периодически выделяют во внешнюю среду излишки жидкости и продукты диссимиляции.

Большинство простейших имеет одно ядро, но есть представители с несколькими ядрами. Ядра некоторых простейших характеризуются полиплоидностью.

Цитоплазма неоднородна. Она подразделяется на более светлый и гомогенный наружный слой, или эктоплазму, и зернистый внутренний слой, или эндоплазму. Наружные покровы представлены либо цитоплазматической мембраной (у амебы), либо пелликулой (у эвглены). Фораминиферы и солнечники, обитатели моря, имеют минеральную, или органическую, раковину.

Особенности жизнедеятельности простейших

Дыхание, т. е. газообмен, происходит через всю поверхность клетки.

Раздражимость представлена таксисами (двигательными реакциями). Встречаются фототаксис, хемотаксис и др.

Размножение простейших

Бесполое - митозом ядра и делением клетки надвое (у амебы, эвглены, инфузории), а также путем шизогонии - многократного деления (у споровиков).

Половое - копуляция. Клетка простейшего становится функциональной гаметой; в результате слияния гамет образуется зигота.

Для инфузорий характерен половой процесс - конъюгация. Он заключается в том, что клетки обмениваются генетической информацией, но увеличения числа особей не происходит.

Многие простейшие способны существовать в двух формах - трофозоита (вегетативной формы, способной к активному питанию и передвижению) и цисты, которая образуется при неблагоприятных условиях. Клетка обездвиживается, обезвоживается, покрывается плотной оболочкой, обмен веществ резко замедляется. В такой форме простейшие легко переносятся на большие расстояния животными, ветром и расселяются. При попадании в благоприятные условия обитания происходит эксцистирование, клетка начинает функционировать в состоянии трофозоита. Таким образом, инцистирование не является способом размножения, но помогает клетке переживать неблагоприятные условия среды.

Для многих представителей типа Protozoa характерно наличие жизненного цикла, состоящего в закономерном чередовании жизненных форм. Как правило, происходит смена поколений с бесполым и половым размножением. Образование цисты не является частью закономерного жизненного цикла.

Время генерации для простейших составляет 6-24 ч. Это означает, что, попав в организм хозяина, клетки начинают размножаться по экспоненте и теоретически могут привести его к гибели. Однако этого не происходит, так как вступают в силу защитные механизмы организма хозяина.

Медицинское значение имеют представители простейших, относящиеся к классам саркодовые, жгутиковые, инфузории и споровики.

Классификация простейших . По классификации М.В.Крылова (1996 г.) простейшие выделены в отдельное царство Protista, включающее 7 типов. Простейшие, обитающие в организме человека, относятся к следующим классам: Entamoebidea (дизентерийная амеба), Kinetoplastidea (лейшмании, трипаносомы), Diplomonadea (лямблии), Parabasalea (трихомонады), Coccidea (плазмодии малярии, токсоплазмы, кокцидии), Rimostomatea (балантидии).

Протозойные болезни человека являются глобальной проблемой, так как встречаются практически повсеместно. Значительное распространение в странах с жарким климатом имеют амебиаз, трипаносомоз, лямблиоз. Наибольший ущерб наносит малярия.

Биология некоторых простейших

Дизентерийная амеба . Многие виды амеб обитают в организме животных и человека (род Entamoeba), однако имеется только один вид - дизентерийная амеба - Entamoeba histolytica, который может быть возбудителем тяжелой формы кишечного колита – амебиаза.

Амеба эта имеет 20-30 мкм в диаметре, передвигается, изменяя форму тела и образуя кратковременные выросты - псевдоподии, или ложноножки. Размножение бесполое, путем деления. Живет в толстых кишках человека и обычно питается бактериями, не нанося никакого вреда (носительство). Но в ряде случаев дизентерийная амеба начинает вести себя иначе: проникает под слизистую оболочку кишки, начинает там питаться эритроцитами и другими клеточными элементами хозяина и усиленно размножаться. Слизистая кишечника изъязвляется, результатом чего бывает тяжелый кровавый понос (колит).

Распространение кишечных амеб осуществляется при помощи цист, выходящих вместе с фекальными массами наружу. Цисты очень стойки и длительное время сохраняют жизнеспособность и инвазионность (способность к заражению при попадании в кишечник человека). По строению цист можно установить диагноз вида амебы. Кишечная амеба имеет восьмиядерные цисты, тогда как дизентерийная - четырехядерные.

Лямблии . Лямблии (Lamblia intestinalis) существуют в виде вегетативной формы (трофозоит) и способны образовывать цисты. Вегетативная форма активная, подвижная, грушевидной формы. Передний конец тела закруглен, задний - заострен. Длина 9-18 мкм. Имеется два ядра, 4 пары жгутиков. Пищу всасывают всей поверхностью тела. Размножаются путем продольного деления.

Лямблии обитают в верхнем отделе тонкого кишечника, попадая в нижние отделы кишечника, где условия для них неблагоприятные, превращаются в цисты, которые и выделяются обычно с испражнениями.

Цисты хорошо сохраняются в окружающей среде, в зависимости от температуры воздуха - до месяца. Заражение может произойти через загрязненные руки, игрушки, пищу и воду. Цисты, попадая в кишечник, превращаются там в вегетативные формы.

Заболевание вызываемое лямблиями называется лямблиоз.

Трихомонада мочеполовая (влагалищная). В организме человека обитает в мочеполовых путях Trichomonas vaginalis мочеполовая (влагалищная) трихомонада.

Размеры 20-36 мкм. На переднем конце расположены 4 жгутика, отходящих от базальных зерен и ундулирующая мембрана. Через всю цитоплазму, от области базальных зерен до конца клетки, проходит опорная эластичная нить (аксостиль). У основания имеется щелевидное углубление, через которое происходит захват пищи (бактерий) посредством фагоцитоза, возможно осмотическое питание. Трихомонады - подвижные организмы. Стадия цисты отсутствует.

Плазмодии малярии. Плазмодии, вызывающие у человека малярию, относятся к четырем видам:

Plasmodium vivax - возбудитель трехдневной малярии;

Plasmodium malariae - возбудитель четырехдневной малярии;

Plasmodium falciparum - возбудитель тропической малярии и

Plasmodium ovale - возбудитель малярии, типа трехдневной (овале).

При кровососании зараженный малярийный комар вместе со слюной вводит в ранку спорозоиты - веретенообразные, чуть изогнутые образования длиной 11 - 15 мкм. С кровью они попадают в клетки печени, где развиваются и делятся (тканевая, или экзоэритроцитарная, шизогония).

После нескольких циклов бесполого размножения (шизогонии) начинается подготовка к половому процессу, образование гамонтов.

Дальнейшего развития гамонтов в крови человека не происходит. Оно осуществляется лишь в том случае, если кровь с ними попадает в кишечник малярийного комара при сосании.

Малярийные плазмодии вызывают у человека тяжелое заболевание - малярию.

Токсоплазмы поражают многих диких и домашних животных и птиц, а также человека, в организме которых проходят бесполый цикл развития и размножения (промежуточные хозяева).